程颖：循环细胞内在小细胞内肺癌临床研究中的进展

重复细胞内( Circulating tumor cells，CTCs)作为一种可替代原发的“液体活检标本”，已在集中于性乳胃癌、癌和结直肠癌之前常用肾功能评价。小细胞内白血病(Small celllung cancer，SCLC)组织标本来源不明不足，且不足理论上的监控发作集中于和预测肾功能的脊椎动物圣万。有约年来科学家CTCs在SCLC之前的流行病学分析方法则同步进行了先导研究者，注意到CTCs对SCLC的病症、分期，监控发作、集中于，评估、肾功能以及建立个体抗生素法则方案等具重要意义，本文就CTCs在SCLC流行病学分析方法则之前的研究者困难重重应综述。

一、SCLC患儿CTCs的检验新方法则

CTCs的检验新方法则主要有流式细胞内检验关键技术( fluocytometry，FCM)、脱氧核糖核酸一聚合酶羧化(reverse-transcriptionPCR，RT-PCR)、CellSearch种系统、CTC芯片(CTC-chip)关键技术和膜滤过产物细胞内关键技术(isolation by size of epithelial tumor cells．ISET)等，其之前CellSearch种系统因其半自动化的操作平台，较高的甲基化、敏感性和可重复性，沦为最常分析方法则的CTCs检验新方法则。

早在2004年，Allard等率先分析方法则CelISearch法则检验了99同上白血病（从未列举SCLC同上数）患儿的CTCs，随后Nagrath等换用CTC-chip法则检验了55同上白血病患儿外周屑C TCs。2009年以后的研究者多换用CeIISearch法则检验SCI．C患儿外周屑CTCs，然而该新方法则由于对不足上皮细胞内特征的细胞内会再次出现漏检也许，且与免疫磁珠及甲基化结合的CTCs能够行某些后续的检验，流行病学分析方法则受到限于。

有约年来，随着碳纳米管新能源的蓬勃发展，特异性CTCs表面圣万的甲基化识别分f剪裁的碳纳米管材料结合扰流控关键技术的CTCs检验平台的研究者受到最常关注，2013年，《自然》（Nature）杂志将CTCs碳纳米管检验选为最具创新性和产物实用价值的病症新新方法则，成果令人瞩目。但就目前来看，既有的CTCs检验新方法则各有利弊，仍从未研究者证实哪种新方法则对SCLC的CTCs检验不够有优势。着眼期望，亟须开发甲基化、敏感性不够高的CTCs检验关键技术，为SCLC的基本和流行病学研究者带来突破。

二、CTCs在SCLC流行病学分析方法则之前的研究者境况

（一）CTCs计数与SCLC的病症、分期

有约年来多项研究者显示CTCs计数水准与SCLC的病症、分期有密切关系0 2009年Tanaka等分析方法则CeIISearch法则检验了1 50同上7.5ml外周屑CTCs，其之前白血病1 25同上、非恶性25同上，白血病患儿包括116同上非小细胞内白血病(non-small cell lung cancer，NSCLC)和9同上SCLC。

研究者得出SCLC患儿CTCs阴性率为66.70-/0（6同上／9同上），值得注意高于NSCLC患儿的CTCs阴性率(胃癌25.9%，鳞癌40.9%；胃癌对比SCLC，P

翌年，Hou等分析方法则CeIISearch法则检验了50同上初治的SCLC患儿外周屑CTCs，包括20同上限于期SCLC (limited disease，LD-SCLC)患儿和30同上最常期SCLC(extensive disease，ED-SCLC)患儿，两条线期ED-SCLC及LD-SCLC患儿的之前位CTCs计数分列237和2个/7.5ml屑，7同上从未检出CTCs的患儿以外为LD-SCLC，验证CTCs计数水准与SCLC分期无关。

十分相似的事实在2012年被日本学者Naito等证实，科学家在51同上SCLC患儿之前立用CeIISearch法则检验两条线期CTCs水准，得出ED-SCLC,患儿的之前位CTCs计数为9.5个f 7.5ml屑，而LD-SCLC仅为1个／7.51111屑，大幅度验证ED-SCLC患儿的CTCs水准高于LD-SCLC患儿。

（二）CTCs评估SCLC的及肾功能

CTCs是否可作为评估SCLC和肾功能的有救指f,勺科学家们一直在揭示的关键问题。Houi等在2009年通过CellSearch法则检验了50同上SCLC患儿(LD-SCLC20同上，ED-SCLC30同上)的CTCs，注意到CTCs>300个/7.5ml屑的患儿及CTCs

两条线期CTCs>=50和

在该研究者之前SCLC患儿的肾功能界定数值的游戏8个/7.5ml屑，以此将患儿分为CTCs>=8及

Hiltermann等在2012年同样分析方法则CellSearch法则检验59同上SCLC患儿在两条线期、1窄周期抗生素后及4窄周期抗生素过后后外固屑CTCs水准，其之前ED-SCLC患儿38同上，LD-SCLC患儿2 1同上c两条线期有43同上患儿(730-/o)CTCs≥2个/7.5ml屑，CTCs>215个/7.5ml屑和CTCs

经过1窄周期抗生素后患儿CTCs水准减缓，且1窄周期抗生素后CTCs

科学家推测CTCs水准是SCLC肾功能的独立影响表征，其之前1窄周期抗生素后CTCs水准是SCLC和肾功能最强的预测表征。

2013年ASCO发表的ECOG1508研究者之前，科学家更进一步在155同上ED-SCLC之前投身于特异性疗法则，并对其之前123同上患儿两条线期CTCs同步进行检验，得出特异性疗法则从未能延长ED-SCLC患儿的PFS和OS，但注意到两条线期CTCs≤l00和CTCs>100个／7.5ml屑的mPFS分列4.4和4.3个月（P=0.07），OS分列10.7和7.2个月(P=0.01)。科学家认为虽然特异性疗法则没人能提高ED-SCLC患儿的PFS和OS，但却注意到了CTCs也许是SCLC患儿的肾功能圣万。

都只，Igawa等更进一步分析方法则OBP-401检验检验SCLC患儿外周屑CTCso分析方法则OBP-401检验检验乳胃癌和胃癌患儿CTCs的无关研究者已有前期另据。研究者纳入30同上韧治的SCLC患儿，29同上患儿(96%)外周屑CTCs阴性。在两条线期，21同上患儿CTCs

（三）CTCs监控SCLC的发作和集中于

既有的研究者说明通过检验CTCs的再次出现来监控SCLC的发作和集中于具重要的流行病学意义o Tanaka等研究者注意到CTCs水准‘j 125同上白血病患儿（包括9同上SCLC患儿）困难重重值得注意无关，尤其是与边上集中于密切（AUC-ROC 0,873 p

基于这些信息，作者认为CTCs可作为监控白血病边上集中于的脊椎动物标记物。Natio等研究者注意到SCLC在两条线期、疗法则过后后及发作后CTCs的阴性率分列68.6%、26.5%和67.6，提醒SCLC发作后外周学CTCs水准升高，频发边上集中于脊柱的为数为0、1和>=2的患儿其之前位CTCs计数分列2.0、7.5和21个/7.5ml屑,提醒CTCs水准与边上集中于脊柱的为数有关，边上集中于越多，CTCs计数越高（p

三、CTCs在SCLC流行病学分析方法则之前的探索侧向

发作和集中于是导致患儿疗法则失败和死亡的主要理由，幸而注意到的发作和集中于并采敢积极理论上的疗法则措施可显著提高患儿求增重。然而，由于SCLC不足能够监控发作和集中于的脊椎动物圣万，且常规影像学检查能够注意到扰集中于灶及扰小残留溃疡，导致频发发作和集中于的SCLC患儿不可幸而不能接受病症和疗法则。

流行病学之前以外LD-SCLC的患儿肾功能差别较大，提醒有些限于期的患儿在病症时也许已频发了影像学不可注意到的扰集中于而沦为潜在的最常期患儿。通过检验外周屑CTCs的再次出现及为数变化从而对SCLC患儿体内精神状态同步进行实时、时序地监控和评价，幸而注意到的发作、集中于，将有助于流行病学医生对疗法则必定会的深知和疗法则策略的自由选择，但究竟CTCs的为数或变化数值为多少时能够可靠反映SCLC的发作或集中于尚能不明确，须要不够多的循证医学证据应支持。

CTCs在评估SCLC患儿疗法则尤其的分析方法则尚能保持稳定探索过渡期，疗法则每一次之前CTCs为数的变化与SCLC患儿抗生素的无关性及其与SCLC患儿放疗必定会的自由选择等关键问题在期望须大量的流行病学研究者。有约5年，对CTCs是否可作为SCLC患儿肾功能指标的研究者逐渐快速增长，但SCLC最佳的肾功能CTCs界定数值尚能无考证，争议多有。

其之前3项来自Hou、Naito、Hiltermann的研究者将SCLC的肾功能CTCs畀定数值分别的游戏为50、8和2个／7.5ml屑，差别极大，这也许与研究者换用的统计学新方法则不尽相同以及入组样本量较少有关。有约期意大利学者Normanno等论者将ED-SCLC和LD-SCLC患儿分开研究者，对两条线期、l窄周期抗生素后CTCs以及疗法则前后CTCs的变化数值分别的游戏肾功能界定数值，为期望的研究者提供了属于自己思维。笔者所在的科研团队也正致力于必先SCLC患儿肾功能最佳CTCs界定数值的研究者，结果令人期望。

的个体抗生素法则是疗法则种系统的蓬勃发展侧向。SCLC患儿对抗生素类固醇的底物不存在值得注意的遗传遗传，其主要理由也许与复杂的异质性、遗传表达差别及多态性有关。所以，逐步明晰SCLC的遗传组学特征对构建真正意义上的SCLC个体抗生素法则尤为重要。有约期必先学者王洁等研究者人员通过分析方法则单细胞内遗传分子生物学目的对患儿单个CTC同步进行全遗传组、外显子遗传组分子生物学。

在此项研究者之前，谢晓亮系主任申请专利的多重退火和烯烃重复的扩增关键技术(MAIBAC)，成功构建了对患儿外周屑单个CTC的全遗传组扩增和剖面分子生物学，在单个细胞内水准探测全遗传组遗传拷贝数反转(CNVs)和单多肽反转(SNVs)o单细胞内水准CTCs遗传组分子生物学关键技术可幸而提供如MRSA遗传突变等个体抗生素法则所须的重要信息，同时也为期望SCLC特异性类固醇的开发提供该软件。

SCLC组织标本难以受益，限制了后续各项检查和研究者的开展，而利用CTCs构建的SCLC重复细胞内再生糙( CTC-derived explants，CDXs)模型，期望会补救这一迫切难题。都只，Hodgkinson等更进一步将6同上ED-SCLC患儿lOml外周屑之前的CTCs产物出来后注射到免疫缺陷果蝇皮下，结果在4只果蝇身上呈现出了CDXs，验证SCLC患儿的CTCs具致糙性。

同时分析方法则CelISearch法则检验这6同上SCLC患儿的CTCs，得出成功呈现出CDXs的4同上患儿的CTCs计数以外>400个／7.5ml屑，而另外2同上从未呈现出CDXs的患儿其CTCs计数分列222和20个／7.5ml屑，提醒SCLC的CTCs致糙性与外周屑CTCs教量有关。大幅度分析注意到相比较于抗生素敏感性SCLC，抗生素MRSA性SCLC患儿的CDXs倍增星期窄、生长不够迅速。对3同上CDXs得到顺铂和立足于泊苷抗生素类固醇，其敏感性顺序排列为CDX3>CDX2>CDX4，相应患儿的OS分列9.7.3.5.0.9个月，提醒对CDXs同步进行排泄药敏检验可以间接底物患儿求生存星期。

该研究者显示以外SCLC的外周屑CTCs具肿瘤特性，可同步进行排泄培养、呈现出与原发高度十分相似的CDXs，为SCLC患儿的排泄药敏检验、MRSA机制分析等一系列检查和研究者提供了补充的组织，补救了SCLC患儿标本来源不明不足的关键问题。

事实

从现行的研究者可以看出，虽然CTCs在SCLC之前的流行病学分析方法则仍保持稳定探索过渡期，但境况广阔。目前，诸多产物性研究者准备同步进行之前，相信随着研究者的不断深入，CTCs期望会沦为SCLC的突破口，期望CTCs在SCLC的课题之前为我们带来惊喜。

编辑： 枯